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  Takara Real Time PCR
  检测技术服务
地  址:大连开发区东北二街19号(116600)
电  话:0411-87643922(专线电话)
传  真:0411-87619946,87621675
E-mail:[email protected]
 
  本公司对Sample的情况及结果保证严守秘密
   
 
Real Time PCR技术即是在PCR反应体系中加入荧光物质,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,对未知模板进行定量分析的方法。因其无需电泳,且具有快速性及定量性而倍受青睐。本公司承接利用Real Time PCR法进行课题研究的技术服务,可以提供从引物设计合成开始,至Real Time PCR反应检测的一条龙技术服务,欢迎惠顾!
 
■ 服务项目
◇ 定性分析 (SNP分型解析等)
◇ 绝对定量
◇ 相对定量 (mRNA表达量分析)
◇ DNA Microarray数据确认
◇ RNAi效果确认 (siRNA的筛选)
 
■ 检测方法
嵌合荧光法,双标记荧光探针法,Cycling探针法。
 
■ Real Time PCR装置
使用本公司Thermal Cycler Dice Real Time System、Life Technologies公司的ABI 7500 Fast及Roche的Lightcycler 480 II 等多种Real Time PCR装置。
 
    服务项目说明
 
■ 定性分析
PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测,可以通过Real Time PCR方法,简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测,同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。
 
■ 绝对定量
绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后,可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数) 分析。
 
■ 相对定量 (mRNA表达量分析)
基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量,然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较,可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene,如:GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测,可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正,达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
 
    服务要求
 
如果您需要进行此项服务,请填写“Takara Real Time PCR 检测技术服务委托书”。填写后通过传真或E-mail发送给我们或当地代理商。
进行mRNA表达量分析时,请寄送足量的并且保证纯度的Total RNA (浓度在500 ng/μl以上,体积在 20 μl以上)。如果目的基因表达量低时,应尽量提供更高浓度的Total RNA。

如果提供的材料为细胞或组织,DNA、RNA的提取费用另收。 同时应保证材料新鲜,动物细胞数为106以上,动物组织为100 mg以上。
 
    服务项目示例-以相对定量为例
 
■ 引物设计合成
具体情况请参见“Takara Real Time PCR用引物设计验证一条龙服务”部分内容。
 
■ 制作标准曲线
使用设计合成的引物,以Total RNA反转录的cDNA为模板,进行Real Time PCR反应,确认引物模板的反应性能。然后将cDNA进行5个浓度梯度稀释,制作标准曲线,以供进一步定量分析使用。
 
■ Real Time PCR反应及定量分析
对客户提供的RNA Sample,进行Real Time RT-PCR反应,并进行定量分析。用相对定量方法进行定量分析时,要对管家基因等参比基因进行同样操作,用所得到的值进行RNA量的校正,最后求得目的基因的相对表达量。
 
    价格 · 交货期
 
服务项目 目录价 (元/ 基因/ 样品) 交货期*
定性分析 DNA 样品 1~5 个样品 200 3周
6~20 个样品 150
21~50 个样品 100
50 个以上样品 询价
RNA 样品 1~5 个样品 250
6~20 个样品 200
21~50 个样品 150
50 个以上样品 询价
绝对定量 DNA 样品 1~5 个样品 250 3~4周
6~20 个样品 200
21~50 个样品 150
50 个以上样品 询价
RNA 样品 1~5 个样品 300
6~20 个样品 250
21~50 个样品 200
50 个以上样品 询价
相对定量 RNA 样品 1~5 个样品 400 3~4周
6~20 个样品 300
21~50 个样品 200
50 个以上样品 询价
SNP分型解析 DNA 样品 1~5 个样品 250 3~4周
6~20 个样品 200
21~50 个样品 150
50 个以上样品 询价
 
■ 报价说明
以上技术服务报价是以提纯的核酸 (即:DNA或RNA) 为起始材料设定的,如果需要进行核酸纯化时,费用另计。
以上技术服务报价是针对采用嵌合荧光法的报价,如果实验采用双标记荧光探针或Cycling探针方法时,相应的探针合成费用另计,价格请具体垂询。
以上技术服务报价不包括标准品构建费用,如需进行标准品构建,费用另计,价格请具体垂询。
相对定量检测时,客户可选择标准曲线法或双delta法进行数据分析。但如果委托样品数< 5 个时,我们会默认为采用双delta 法进行分析,如选择标准曲线法,则需加收500元/基因的标准曲线制作费用。
相对定量检测时,以上报价含一组管家基因的校正费用,如需进行多管家基因校正,费用另计,价格请具体垂询。
如因实验材料等非本公司原因造成某实验步骤失败,使实验提前终止,已启动的实验项目仍正常收费。
 
 
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